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星状病毒核酸检测标准物质的研制

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2017-06-07 来源:食品科学网
责任编辑:食品科学
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  作者:徐蕾蕊,魏海燕,林长军,马 丹,汪 琦,张西萌,李 丹,付溥博,刘 莉,魏永新,赵晓娟,曾 静

  关键词:星状病毒;核酸;定量实时聚合酶链式反应;数字聚合酶链式反应;标准物质

  内容:目的:研制用于食品中星状病毒核酸检测的cRNA标准物质。方法:利用基因克隆体外转录方法制备星状病毒cRNA纯品,初步定量后稀释至适宜浓度进行分装,其中一部分分装样品添加RNAsafe处理,剩余部分不做处理,制备2 种标准物质样品。采用实时荧光定量实时聚合酶链式反应(real-time-polymerase chain reaction,RTPCR)方法检验2 种标准物质样品均匀性和稳定性。样品中RNA浓度(拷贝/μL)通过荧光定量RT-PCR和数字PCR联合定值获得,并进行不确定度分析。结果:均匀性结果显示2 种样品组间精密度与组内精密度差异均无统计学意义(P>0.05)。稳定性检验表明20~25 ℃ 10 d、4 ℃ 14 d、-20 ℃ 3 个月及-80 ℃和液氮6 个月2 种样品cRNA含量无显著变化。RNAsafe(-)标准物质定值为:(1.652±0.143)×108 拷贝/μL(-80 ℃)和(1.652±0.135)×108 拷贝/μL(液氮)。结论:RNAsafe(-)标准物质样品可作为用于星状病毒核酸检测的标准物质。

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