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小麦蛋白质二硫键异构酶基因的克隆、表达及重组酶性质

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2017-06-07 来源:食品科学网
责任编辑:食品科学
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  作者:刘 光,胡松青,张婷婷,王敬敬,李 琳,侯 轶

  关键词:小麦蛋白质二硫键异构酶|克隆|表达|酶学性质

  内容:目的:克隆小麦蛋白质二硫键异构酶(wheat protein disulfide isomerase,wPDI)基因,实现其在大肠杆菌中的表达并探究其酶学性质。方法:以小麦种子总RNA为模板,逆转录并扩增得到wpdi,并以pET-30b为表达载体、大肠杆菌BL21(DE3)为宿主菌进行原核表达,表达产物经金属螯合层析纯化后进行了酶学性质研究。结果:克隆的基因全长1 548 bp,与“Wyuna”品种小麦wpdi基因相似性达99%。构建了pET-30b-wpdi表达载体,获得wPDI的最佳表达条件为:诱导温度22 ℃,诱导时间6 h,诱导剂浓度0.5 mmol/L。该酶含4 个硫氧还蛋白结构域,分子质量约为66.2 kD,具有二硫键的还原酶和异构酶活性以及分子伴侣活性。结论:对重组wPDI的表达和酶学性质研究,为wPDI在面制品加工及其他方面的应用提供参考依据。

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