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重组大肠杆菌合成光学纯L-苯基乳酸

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2017-06-07 来源:食品科学网
责任编辑:食品科学
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  作者:朱益波,鲁如彬,程 俊,王 颖,齐 斌,王立梅

  关键词:L-2-羟基-3-苯基丙酸|巨大芽孢杆菌Z2013513|L-乳酸脱氢酶|葡萄糖脱氢酶|NADH再生|全细胞催化

  内容:以巨大芽孢杆菌Z2013513基因组DNA为模板,分别PCR扩增得到L-乳酸脱氢酶基因(ldhL)和葡萄糖脱氢酶基因(gdh),将gdh与ldhL分别连接至表达载体pETDuet,获得共表达质粒pETDuet-ldhL-gdh。经转化和验证获得重组菌大肠杆菌BL21(DE3)/pETDuet-ldhL-gdh。十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳和比酶活力分析表明重组蛋白L-乳酸脱氢酶和葡萄糖脱氢酶均成功表达且具有酶活力。在37 ℃、200 r/min条件下,经60 min反应,催化底物苯丙酮酸合成24.26 mmol/L L-苯基乳酸。产物L-苯基乳酸光学纯度(>99%),底物摩尔转化率(59.55%),结果表明此重组体系可用于高效合成高光学纯L-苯基乳酸。

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