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枯草芽孢杆菌纤维素酶基因整合载体的构建

阅读:
2017-06-15 来源:食品科学网
责任编辑:食品科学
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  作者:聂利波,王占彬,史敦胜,宋洋洋,李 旺

  关键词:同源重组;纤维素酶基因;枯草芽孢杆菌

  内容:目的:以枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)为宿主,构建纤维素酶基因整合表达载体,获得能够表达纤 维素酶并且降解纤维素的工程菌。方法:通过聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)从B. subtilis LN 基因组中克隆同源片段M1、M2基因片段,以质粒pGEM-T为载体,将同源片段M1、M2、启动子P43和葡萄糖苷 酶基因CelKg连接在一起构建整合载体pGEM-Kmpgmt,并采用双交换同源重组的方式将其转化进入B. subtilis LN 基因组中。结果:通过PCR和双酶切验证整合载体构建完成,并成功整合到野生型B. subtilis LN中,获得重组菌 B. subtilis Kpg。刚果红染色结果显示重组菌对羧甲基纤维素钠有降解作用。改良培养基37 ℃条件下摇瓶培养,重组菌 B. subtilis Kpg生长至18 h时上清液中纤维素酶活力比野生型B. subtilis LN提高了115%。

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