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基于可视化环介导等温扩增技术快速检测金黄色葡萄球菌

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2019-10-30 来源:食品科学网
责任编辑:食品科学
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  作者:郭建平,万佳佳,陆兆新,吕凤霞,张充,赵海珍,别小妹

  关键词:可视化;环介导等温扩增技术;检测;金黄色葡萄球菌;羟基萘酚蓝

  内容:应用环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)建立基于颜色判定的快速、灵敏的金黄色葡萄球菌检测方法。根据金黄色葡萄球菌特异性靶基因SAR0395设计LAMP引物,建立可视化LAMP检测方法。优化的反应体系为:1.6 µmol/L内引物(FIP和BIP),0.2 µmol/L外引物(F3和B3),4.0 mmol/L MgSO4,1.0 mmol/L dNTPs,0.4 U/µL Bst 2.0 WarmStart™ DNA聚合酶,120 µmol/L羟基萘酚蓝,扩增温度60 ℃,扩增时间60 min。在可视化LAMP体系中添加两条环引物(LF和LB)反应时间可缩短至20 min。该可视化LAMP反应60 min,其基因组灵敏度可以达到0.010 3 fg/μL,菌落灵敏度可以达到1.9 CFU/mL;利用46 株金黄色葡萄球菌和24 株非金黄色葡萄球菌证实该可视化LAMP具有良好的特异性和可靠性。本研究中建立的可视化LAMP可为金黄色葡萄球菌的快速检测提供一种新的技术。

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