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水产品中创伤弧菌ddPCR定量方法的建立

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2020-06-29 来源:食品科学网
责任编辑:食品科学
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  作者:马丹,魏咏新,李丹,魏海燕,徐蕾蕊,汪琦,付溥博,张西萌,曾静

  关键词:微滴数字聚合酶链式反应;创伤弧菌;实时荧光聚合酶链式反应

  内容:选取创伤弧菌单拷贝基因met为靶基因,设计引物探针,建立对创伤弧菌准确定量的微滴式数字聚合酶链式反应(droplet digital polymerase chain reaction,ddPCR)方法,并进行特异性、灵敏度和重复性实验,同时与实时PCR(real-time PCR)方法进行比较。结果显示,所建立的ddPCR方法可以快速、高效地检测出创伤弧菌,细菌纯培养物中其定量限可达323 拷贝数/mL,检测限可达61 拷贝数/mL,人工污染牡蛎样品中能最低能检测到1.13×102 拷贝数/g的目标菌。对人工污染样品中目标菌的检测,ddPCR的定量结果约为平板计数结果的1.4 倍,比real-time PCR方法的检测更加稳定准确。本研究建立的ddPCR检测方法能快速准确、特异、灵敏地定量检测创伤弧菌。

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