作者：吴占文，王帅，康婕，李涛，李红娜，蔡杰，张昊，杨艳歌，袁飞

  关键词：诺如病毒；逆转录-酶促重组等温扩增技术；双重荧光；快速检测；贝类

  内容：目的：基于逆转录-酶促重组等温扩增（reverse transcription-enzymatic recombinase amplification，RT-ERA）技术，以MS2作为模式过程控制病毒，建立一种贝类食品中GI与GII型诺如病毒（norovirus，NoV）双重荧光RT-ERA快速检测方法。方法：分别将GI、GII NoV参考靶序列克隆到带有T7启动子的载体中，通过体外转录的方式获得高纯度NoV RNA参考样品。以设计的MS2噬菌体引物探针，与实验室前期筛选的GI、GII NoV引物探针进行双重荧光RT-ERA实验，并对反应体系和反应程序进行优化，分析方法的灵敏度。最后，采用建立的方法开展真实样本检测，以GB 4789.42—2016《食品微生物学检验 诺如病毒检验》为参比方法进行检测结果对比，确定方法的准确性和可行性。结果：建立MS2与GI、MS2与GII两组双重荧光RT-ERA检测方法，最佳引物及探针体积分别为4.1 μL与1.8 μL，检测时间可缩短至10 min左右，且最低可检出102 拷贝/μL的NoV核酸样品。应用所建立的方法对29 份真实样品进行检测，检测结果与GB 4789.42—2016一致。结论：本研究建立的双重荧光RT-ERA检测方法可实现对MS2、GI和GII NoV的同时检测，且灵敏度高、准确性强，为今后NoV现场快速检测提供一定基础。