作者：秦伟,黄昆仑,贺晓云,李欣,许文涛,林希瑾,罗云波

  关键词：抗虫基因； cry2A*； 转基因水稻； 表达； 纯化

  内容：通过PCR从克隆载体pUC18-3Z/Cry2A*上扩增水稻偏爱型密码子优化的抗虫基因cry2A*,经限制性内切酶NdeI和BamHI双酶切定向插入到原核表达载体pET-28a(+),成功构建了在表达蛋白的N端只带有6个组氨酸标签的融合蛋白表达载体pET-28a(+)/Cry2A*,并转入大肠杆菌BL21(DE3)中。通过对其表达条件进行优化,发现在IPTG浓度为0.05mmol/L、诱导时间为3h、诱导温度为20℃的表达条件下目的蛋白大部分以可溶形式进行表达。采用Ni-NTA亲和柱纯化得到高纯度目的蛋白,薄层扫描分析蛋白纯度达到95%。