食品界

Introduction

肝病是一种常见病，肝病主要包括乙型肝炎、丙型肝炎、酒精性肝病、非酒精性脂肪性肝病。全世界每年约有200万人死于肝损伤相关肝病，100万人死于肝硬化并发症。肝损伤发生后，肝星状细胞被激活并诱导产生收缩、增殖和成纤维细胞样肌成纤维细胞样表型，导致胶原和其他细胞外基质成分的积累，这些物质的不断刺激和积累导致肝脏结构和肝神经功能的破坏，导致肝细胞凋亡，肝功能下降。目前，对肝脏的日常保护还没有特别好的方案。人们通常在肝损伤已经发生后才服用治疗药物，这可能会导致多种药物反应。亚洲长寿地区的人们常有吃保健食品的习惯，许多保健食品具有提高人体免疫力、改善肠胃道、保护肝胆等功效。

在中国，金银花（Lonicerae japonica Flos）作为茶叶食用已有一千多年的历史。在现代，由金银花制成的保健茶、火锅调料、牙膏等产品被广泛使用。比如以金银花为主要原料之一的加多宝凉茶，已经上市26年之久。目前，常用甘草酸苷、硫普罗宁、恩利卡生等药物进行肝损伤的治疗，与西药相比，金银花茶具有无不良反应、价廉、可口等优点。但仍存在一些问题：其化学成分复杂，质量难以控制，作用机制不明确。因此，寻找金银花保肝活性化合物，并探讨其作用机制很有意义。

黑龙江中医药大学研究生院王松、姜海等人在本文以传统中药金银花为研究对象，筛选出金银花中具有保肝活性的化合物，探寻了其作用机制，对金银花的质量控制和应用给出了特有的角度。

Results and Discussion

谱效关联研究

本研究首先使用UPLC-PDA建立了十批次不同产地金银花的指纹图谱，共标记13个共有色谱峰（图1）；然后考察了十批次金银花提取物对肝脏的保护作用，结果表明，长期服用金银花提取物的小鼠，在化学物质（CCl4）进入体内后，血清中谷丙转氨酶（ALT），谷草转氨酶（AST），总胆红素（TBIL），肿瘤坏死因子（TNF-α）的含量明显低于对照组，肝脏中谷胱甘肽（GSH）含量明显高于对照组（图2）。使用谱效关联的方法，得到3个对保肝有高贡献度的色谱峰，经标准品比对，确定为断氧化马钱子苷、异绿原酸A和异绿原酸C（图3）。

图1 金银花的指纹图谱

图2 金银花提取物可有效保护肝脏

图3 断氧化马钱子苷、异绿原酸A和异绿原酸C为金银花保肝活性化合物

作用机制研究

使用网络药理学构建金银花化学成分-靶点-疾病图，结果见图4，共包含61个节点，135条边，表示活性成分、靶点和通路的相互作用关系，将相关数据构建成蛋白互作网络图，得到金银花起保肝作用的重要靶点——Caspase-3。天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶（Caspase）家族中重要的一员Caspase-3，在正常状态下以非活化的酶原形式存在，经活化后产生有活性的执行者，对维持细胞骨架、DNA修复、信号转导和细胞周期控制至关重要的蛋白质进行切割和失活，是细胞凋亡的主要介导因子，沉默Caspase-3或者使用Caspase-3抑制剂可以抑制肝细胞的过度凋亡。分子对接结果表明（表1），三种活性成分均可与Caspase-3蛋白良好对接。金银花活性化合物可能通过直接抑制Caspase-3蛋白活性，减少肝细胞过度凋亡。

图4 金银花保肝化合物作用靶点的获取

表1 金银花保肝化合物均与Caspase-3蛋白良好对接

Conclusion

长期食用金银花可有效保护化学物质引发的肝损伤，本研究筛选出断氧化马钱子苷、异绿原酸A和异绿原酸C为金银花中的保肝活性化合物，构建了金银花化学成分-靶点-疾病网络图，这些化合物通过直接抑制Caspase-3蛋白减少肝细胞凋亡，保护肝脏。

第一作者

王松，男，医学硕士研究生，主要研究方向为中药、天然药物药效物质基础及药动学研究。在国内外期刊公开发表学术论文10余篇。

通信作者

姜海，男，黑龙江中医药大学研究生院教授，中药炮制教研室主任，硕士生导师，国家中医药管理局重点学科中药炮制学学科后备带头人，教育部高等学校中药学类专业教指委下设中药炮制学课程联盟理事，世界中医药联合会中药化学分会理事，中华中医药学会中药炮制学会理事，中国中药协会人参属专委会理事，《世界中医药》杂志青年编委，国家自然科学基金委函评专家，多本国际SCI期刊审稿人。