2 纳米颗粒壁材比例的确定

为确定最佳纳米颗粒制备工艺，分别按TC-Zein-比例为4∶1、2∶1、1∶1、1∶2、1∶4制备TC-Zein纳米颗粒并表征。如图2A所示，纯Zein纳米颗粒粒径为（67.66±0.89）nm，PDI为0.199±0.012。加入TC后，在4∶1、2∶1和1∶1的比例下，粒径分别为（96.41±1.01）、（87.37±0.76）nm和（88.04±1.57） nm，PDI在0.159～0.236范围，表明粒径较小且分布均一。然而，在TC比例增加至1∶2和1∶4后，粒径急剧增加至（454.47±9.71） nm和（1 018.23±29.78） nm。表明在一定浓度范围内增加TC比例不会对粒径产生明显影响，但过多TC的加入会导致粒径显著增大。在4∶1、2∶1和1∶1比例下，澄清而可溶的TC的加入降低了Zein纳米颗粒的浊度（图2C、D），而在TC比例增加至1∶2和1∶4后，样品溶液的浊度也发生了显著增加。但是带正电的TC比例提高却并没有显著改变纳米颗粒的表面电势，可能因为粒径的增加导致了比表面积的减小。纳米递送载体保持较小的粒径有利于发挥其高比表面积的优势，与体内相应位点进行相互作用，从而改善活性物吸收。因此，为确保缓释效果，本研究选择适宜粒径范围内壁材含量最高的比例TC-Zein为1∶1用于CAP的递送研究。

3 负载CAP纳米颗粒的表征

为获得最佳包封效果，设置Zein与CAP比例为40∶1、20∶1、10∶1、5∶1、2.5∶1进行探究。如表1所示，在Zein-CAP比例为10∶1、5∶1、2.5∶1时粒径相近，均在76 nm左右，且PDI均较小。而在20∶1和40∶1比例下粒径和PDI则显著增大，40∶1比例下粒径达到（100.65±1.39） nm，PDI为0.317±0.026。由此表明，CAP的加入量过低会导致TC-Zein纳米颗粒的粒径增加，均一性变差。所有负载CAP纳米颗粒的Zeta电位值无显著差异。在包封率和载药量方面，40∶1、20∶1和10∶1比例下的包封率分别为（77.12±4.89）%、（68.37±2.13）%和（66.65±4.84）%，显著高于5∶1和2.5∶1组。其中10∶1比例下的载药量最高，达到（36.85±1.22）μg/mg。综上所述，在Zein-CAP为10∶1时所得纳米颗粒的粒径和PDI较小，包封率较好，载药量最高，因此选择该比例条件用于制备TC-Zein-CAP纳米颗粒。

4 纳米颗粒中的相互作用机制

如图3A所示，Zein中的酪氨酸残基使其在280 nm的激发波长下，在278 nm处有强烈的荧光发射峰，加入TC后荧光强度增加。负载CAP后，Zein和TC-Zein纳米颗粒的内源荧光均发生猝灭，而最大发射波长没有发生改变。荧光猝灭的发生证明CAP与Zein能够有效结合，因此TC-Zein-CAP具有较高的包封率和载药量。

通过FTIR分析CAP、Zein和TC三者间的相互作用。如图3B所示，Zein、TC和CAP分别在3 325、3 480 cm^-1和3 291 cm^-1处存在—OH拉伸振动吸收峰，在2 970、2 929 cm^-1和2 924 cm^-1处存在C—H拉伸倾斜吸收峰，在1 666、1 638 cm^-1和1 643 cm^-1处存在C＝O拉伸吸收峰，在1 538、1 514 cm^-1和1 519 cm^-1处存在N—H弯曲吸收峰。此外，TC在1 080 cm^-1处存在C—O—C拉伸对应的特征峰，CAP在1 467 cm^-1处存在芳香环对应的特征峰。在Zein-CAP中，CAP谱图中500～1 643 cm^-1范围的连续吸收峰被Zein的特征峰掩盖。—OH拉伸振动吸收峰迁移至3 317 cm^-1处，表明二者间存在氢键相互作用。C—H拉伸倾斜、C＝O拉伸以及N—H弯曲对应的吸收峰均发生迁移。在TC-Zein-CAP的谱图中，—OH拉伸振动、C—H拉伸倾斜、C＝O拉伸以及N—H弯曲对应的吸收峰也均发生了迁移，表明三者间存在氢键和疏水相互作用。

5 透射电镜

如图4所示，TC-Zein-CAP纳米颗粒为规则的球形，大小均一，粒径为70～80 nm左右，与动态光散射所得结果（（76.05±1.1） nm）一致。纳米颗粒呈现单颗粒分布，表明所选的Zein与TC比例适宜，不会引发颗粒的黏附聚集。

6 纳米颗粒的稳定性评价

如图5A所示，Zein-CAP在pH 3～4以及pH 7～8下粒径较为稳定，但在pH 5～6范围发生严重沉淀，因此粒径不进行检测。而TC-Zein-CAP则在pH 3～5粒径变化较小，维持在106.7～169.1 nm范围。在pH 6～8下粒径则显著增加至362.0～437.5 nm。Zein等电点在pH 6.2左右，因此仅用Zein作为壁材的纳米颗粒在接近其等电点时会由于静电斥力下降而聚沉。TC-Zein-CAP与Zein-CAP相比在pH 5～6下更为稳定，表明TC的加入增强了纳米颗粒的pH稳定性。

图5B结果显示，Zein-CAP对于离子强度的变化非常敏感，在仅50 mmol/L NaCl浓度下粒径迅速增加由（90.8±0.4） nm至（752.7±25.9） nm。在更高的NaCl浓度下Zein-CAP沉淀析出。TC-Zein-CAP在0～50 mmol/L NaCl浓度范围内粒径也随离子强度的增加而增大，由（106.7±0.4） nm增加至（525.8±21.1） nm；在50～200 mmol/L NaCl浓度范围内粒径则略减小至（411.6±4.7） nm。TC的加入显著改善了纳米颗粒的离子强度稳定性。综上所述，TCZein-CAP具有较好的pH值稳定性和离子强度稳定性。

7 纳米颗粒的体外消化释放特性

如图6所示，在胃消化阶段，TC-Zein-CAP和Zein-CAP中的CAP释放率均较小，且随着消化时间的延长并无明显增加。TC-Zein-CAP的释放率保持在18%左右，Zein-CAP的释放率保持在24%左右。TC-Zein-CAP中TC为递送载体增加了物理屏障，进一步限制了CAP的释放。在肠消化阶段，Zein-CAP的释放率迅速增加，30 min内由（24.86±1.20）%增加至（38.57±2.97）%，2 h后最终释放率为（50.12±1.78）%。TC-Zein-CAP的释放率在肠消化1 h内增长较慢，仅由（18.56±0.34）%增至（22.37±1.17）%。但在1～2 h内释放速率明显增加，最终释放率为（40.08±4.28）%。TC-Zein-CAP中TC的存在延缓了Zein的酶解，因此能够实现更好的CAP缓释效果。

结 论

通过巯基化改性得到巯基含量为（67.244 6±2.546 7） μmol/g的TC，与Zein复合包埋CAP。最佳制备条件为TC-Zein-CAP为10∶10∶1，能够得到粒径为（76.05±1.06） nm，载药量为（36.85±1.22） μg/mg的纳米颗粒。通过荧光光谱、FTIR以及透射电镜验证纳米颗粒对CAP的包埋效果，结果表明CAP能够与Zein有效结合，通过氢键和疏水相互作用形成纳米颗粒，其形状为规则球形，大小分布均一。与Zein-CAP单层包埋相比，TC-Zein-CAP具有更好的pH值稳定性和离子强度稳定性，在体外模拟消化过程中能够实现更好的CAP缓释效果，消化4 h后释放率仅为（40.08±4.28）%。综上所述，采用TC-Zein复合包埋CAP具有粒径小、载药量高、稳定性好的优势，并有望通过缓慢释放CAP改善其口服应用。