苏州农业职业技术学院高岳教授等:新型电物理加工对多尺度蛋白质结构的影响研究进展

2023-11-04作者:来源:责任编辑:食品界 字体A+AA-

食品中的蛋白质营养价值不仅取决于蛋白质和氨基酸的含量,还取决于其结构特征。对蛋白质进行不同加工处理(热处理、冷冻和解冻等)时,会改变蛋白质的功能特性(溶解度、浊度、乳化性、起泡性和胶凝性)。所以,在开发新的蛋白质成分或富含蛋白质的食品时需维持加工过程中蛋白质结构的稳定性和功能性,以扩大其应用领域。新型电物理加工技术主要包括电场技术和电磁场技术(图1),因其适用性广、成本低等特点最早应用在疾病治疗方面,之后逐渐进入食品领域,成为食品加工的一种新技术。

苏州农业职业技术学院食品科技学院的丛海花、高岳*和大连海洋大学食品科学与工程学院的逯晓燕*等介绍新型电物理加工技术(主要包括欧姆加热、静电场、微波、射频和磁场)对多尺度蛋白质结构变化的影响,并结合不同电物理加工技术中蛋白质结构和功能变化的研究结果进行分析,为进一步开展相关电物理加工技术应用提供理论支持。

1 欧姆加热对多尺度蛋白质结构的影响

欧姆加热也称为焦耳加热、电阻加热或导电加热,是指待加热材料(例如反应混合物)作为欧姆加热器,通过交流电流加热的一种点加热技术。由于热和电场的共同作用,欧姆加热可以干扰蛋白质构象及其相互作用,改变其展开机制和聚集模式,从而诱导大分子(如蛋白质)发生特异性变化。在不同的处理条件下,欧姆加热对多尺度蛋白质结构有明显的影响(表1)。欧姆加热过程中产生的电流可干扰蛋白质的静电相互作用,使蛋白质拉伸;或者是电场以一种非常独特的方式影响疏水核或局部蛋白质的疏水性基团,使疏水基团暴露,干扰蛋白质二级和三级结构构象,导致分子之间不同形式的聚合或展开,从而形成较大的聚集体,使得溶解度等功能特性发生变化。

欧姆加热是一种较成熟的加工方式,应用于食品加工过程中还存在一些问题:1)加热速度难以控制;2)对于不导电、水分极低干燥的物料无法加工;3)加热时容易时使物料黏附在电极表面,影响加热效率。因此,后续应扩大欧姆加热的使用范围并且实现精准控温;避免物料接触电极表面,对设备造成影响。目前已有研究使用欧姆加热技术对冷冻食品(金枪鱼)进行解冻,探究其解冻过程中品质的变化,未来可进一步探究其在解冻时蛋白质的变化(变性和氧化)及作用机制。

2 静电场对多尺度蛋白质结构的影响

静电场技术是一种新型的食品加工技术,其可根据输出电压可将静电场分为高压静电场(HVEF)(>2.5 kV)和低压静电场(LVEF)(≤2.5 kV)。HVEF的输出电压很高,可以通过非热力系统避免热量对食品风味、颜色和营养价值的不利影响。与传统解冻相比,在质量变化最小且能耗较低的情况下,可以缩短冷冻食品的解冻时间,但其存在安全隐患,难以应用于大规模肉类加工;LVEF技术通过静电板产生静电场再经变压器升压产生直流电压,避免了物料与放电板的直接接触,提升了安全性能。静电场技术对多尺度蛋白质结构的变化影响如表2所示。


静电场技术主要集中在对肉制品冷冻-解冻方面,而HVEF技术存在电压高、缺乏安全性、对贮藏环境要求高、操作复杂等问题,很难大规模应用,而LVEF技术则不存在实际操作中的安全性问题。因此,应通过调整静电场设备的加工强度和针电极数量以实现规模化应用。近几年研究的DENBA+静电波技术可将电压控制在3 500 V以下,提升了安全性,目前已初步应用于冰箱等冷冻/冷藏设备,但还需对其作用机制进行深入探究。

3 微波对多尺度蛋白质结构的影响

3.1 微波加热

微波加热已成为现代工业食品加工中的常用方法。微波是一种频率在300 MHz~300 GHz之间变化的电磁波。微波加热的原理是由材料吸收微波能量并将其转化为热。食品材料的微波加热主要是通过双极化和离子传导,与传统加热相比,微波加热速度更快、作用更均匀、能耗更少、效率更高、整体更环保。

不同的微波加热条件对多尺度蛋白质结构有明显的影响。研究表明,经微波加热处理的蛋白质溶解度随着微波功率的升高呈现出先增大后减小的趋势,但随着微波功率的增加,发泡性和乳化性能略有增加。微波加热可以通过断裂蛋白质的非共价键(氢键、离子键等),使得蛋白质结构展开,暴露出更多的疏水基团,从而影响蛋白质的结构和功能。

而且微波加热的非热效应也可能对蛋白质的二级和三级结构产生影响最终会导致蛋白质功能特性的改变。然而,到目前为止,微波加热非热效应与蛋白质分子结构演变的相关性并不明确,主要原因是缺乏能够精确控制加热速率或模拟加工过程的设备和方法;并且现在行业主流认为,工业生产使用的微波加热技术并不考虑非热效应。

3.2 微波解冻

目前冷冻保藏是肉及肉制品贮运保鲜最重要的方式,肉制品品质的优劣不仅取决于冷冻保鲜技术,还取决于解冻技术,而微波解冻就是常用的解冻技术之一。微波解冻是利用微波能将冷冻品进行穿透性迅速加热,使原料肉内外同步解冻并升温至不滴水的状态。微波解冻具有速度快、均匀度高且对肌肉组织损伤少等优点,同时也伴随着原料肉局部过热的现象。

微波解冻对蛋白质变化的影响如表3所示。微波解冻会使物料迅速融化,使得物料的表面温度迅速降低,出现局部过热的现象,微波场中食品的温度难以测定,不利于把握解冻时间、控制食品品质。因此,后续的设备应注重物料解冻时的均匀加热和对过程中温度的精准把控。

4 射频对多尺度蛋白质结构的影响

射频(1~300 MHz)是非电离电磁波,原理是由于偶极子分子旋转的极化机制和直接传导效应,在介电材料中产生体积热,从而形成快速均匀的加热过程。与传统加热相比,其设备成本高,但能耗低;与欧姆加热不同,射频能量可以穿透传统的纸板或塑料包装,且产品和电极之间没有任何接触;与微波相比,射频能量可以深入到样品中,更适合处理大尺寸和大块材料。

在不同的处理条件下,射频对蛋白质有明显的影响(表4)。有研究表明,射频加热时由于高频电场引起物料分子内和原子间的摩擦,二硫键、氢键以及静电相互作用遭到破坏,导致蛋白质结构展开,暴露出更多的疏水性氨基酸,并增强水合作用,最终导致溶解度、乳化性、起泡能力以及热稳定性提高。经射频加热后,蛋白质的二级结构之间发生了相互转换,蛋白质的不同类型和状态以及不同的射频加热方法都会影响蛋白质的结构,进而影响其功能特性,而主要的影响因素是最终温度和电极间隙。目前有研究发现,无论是二级结构还是三级结构的变化,磁纳米协同射频处理样品都更接近于新鲜样品,使样品均匀解冻,缩短解冻时间,可减少对样品结构的损伤,提高解冻后鱼蛋白结构的稳定性。

目前射频技术的应用主要集中在热处理、灭菌及解冻等领域,其虽然具有一定的优势,但还具有一定程度的加热不均匀问题,且由于设备投资费用高等原因还未进行工业化应用。若能从设备着手调整适合的电极间隙以提升温度分布的均匀性,射频技术将更能适应目前的加工环境。射频与其他技术协同对食品进行加工也是一个新的研究方向,如磁性纳米协同微波或射频、射频加热联合盐水解冻和射频加热协同磁场等。

5 磁场对多尺度蛋白质结构的影响

磁场是一种看不见、摸不着但真实存在的一种物理场,分为时变磁场和稳态磁场两种。低频磁场(LF-MF)(<300 Hz)属于时变磁场也属于感应磁场,其不依靠空间传递能量,由电压和电流产生感应电场和感应电流来形成磁场;直流磁场(DC-MF)(<400 mT)属于稳态磁场,是向磁场发生器提供稳定的直流电形成磁场。在这类磁场作用过程中食品中水分子会发生磁偶极矩,使得氢键含量增加,水分子之间的键联更紧密,形成的网络更稳定,从而导致热导率升高和冰点冻结,达到加热或冷冻目的。与常规方式相比,磁场具有方便、高效、安全、无残留等特点。磁场在加热过程中可以实现快速升温,在冷冻过程可以形成均匀细小的冰晶,以此来保护食品的品质属性(抑制蛋白质变性、保持良好的持水力和延缓汁液流失等)。

5.1 低频磁场

LF-MF可以增强蛋白质之间的静电相互作用,为水分子提供更多的结合点,并促进蛋白质展开,促使发生聚集反应,改变凝胶强度和WHC,不同的磁场处理条件对食品加工中的蛋白质结构展开有明显的影响。磁场可以增加肌红蛋白总游离巯基的暴露量,且磁场强度越高,暴露的总游离巯基越多,这可能是肌红蛋白结构的展开或巯基还原为游离巯基造成的;并有研究发现,随着LF-MF强度的增加,蛋白质结构展开,疏水基团暴露,氢键减弱,导致α-螺旋断裂,形成β-折叠、无规卷曲和β-转角。

综上所述,在一定的LF-MF下,加热速率、加热方式、pH值等均会影响蛋白质分子间的静电相互作用,导致蛋白质分子重新有序排列,并提供更多的水分子结合位点;随着强度的增加,蛋白质分子逐渐展开,暴露出更多的基团,且减弱了分子内的氢键,导致α-螺旋断裂,使得蛋白质二级结构变得不稳定,最终影响蛋白质的多尺度结构。

5.2 直流磁场

近几年的研究表明,使用DC-MF进行冷藏/冷冻处理会使MP发生去折叠,引起巯基含量和表面疏水性的变化,导致蛋白质发生聚集,增强蛋白质之间的相互作用,从而改善凝胶的WHC,增加浊度。DC-MF的磁场强度及处理时间均会影响蛋白质的结构,都可以使蛋白质结构展开,使得一些疏水基团暴露,增强疏水相互作用和水合作用,导致蛋白质发生交联和聚集,导致蛋白质构象改变,而使用DC-MF在22 ℃下处理低盐MP,二级结构并没有明显的变化,说明在低盐溶液可以抑制蛋白质的展开聚集,维持一定的结构稳定性。

5.3 其他

目前,有研究使用2 mT的静磁场对冷冻面团进行冻融处理,随着冻融循环次数的增加,谷蛋白结构由无序向有序转变,说明磁场处理可以保持贮藏过程中谷蛋白的二级结构稳定性;使用振荡均匀磁场(应属交变磁场)对鱼糜进行冻融实验,发现在磁场作用下,含铁离子的冻融鱼糜具有较高的热稳定性,且具有较高的持水能力,而变性焓值较低的原因可能是亚铁离子与蛋白质的结合导致了鱼糜中蛋白质的变性,并说明热稳定性与小冰晶的形成有关。经高频磁场处理(180 mT、1 750 MHz、20 ℃、4 h)后,牛血清白蛋白的二级结构发生了变化。这种变化是由于磁场引起α-螺旋C=O和N—H配体的弯曲排列、振动和弯曲,导致酰胺I带含量显著增加。

磁场对多尺度蛋白质结构的影响汇总如表5所示。


综上所述,磁场的作用效果与pH值、场强和作用时间等条件相关,合适的条件对食品的加工效果有明显的影响,与LF-MF不同的是,DC-MF处理低盐MP,其二级结构并没有明显变化,且仍具有良好的结构稳定性。因此,需要对磁场的条件进行更系统的研究,并探索其作用机制。目前关于磁场与食品加工的研究还处在初期阶段,因食品的千变万化,其磁场的具体参数也并不稳定,因此,还需要更多的研究确定一个合适的磁场参数。目前所拥有的磁场设备还处于实验室研究阶段,需进一步研发适合工业化生产的设备。

6 结语

电物理加工(欧姆加热、静电场、微波、射频、磁场)作为一类新型的食品加工技术,与传统加工方式相比,不仅能缩短加工时间、节能环保,还能在一定程度上减少蛋白质损伤,改善食品品质,具有良好的应用前景。不同的电物理加工技术都会使多尺度蛋白质结构发生变化,如MP纤维间隙更为紧凑;蛋白质二级结构的主要构象α-螺旋在加工过程中被破坏,蛋白质稳定性下降;色氨酸等残基暴露,蛋白质分子之间产生静电相互作用,蛋白质分子拉伸、修饰或解折叠,从而发生不可逆的聚集反应和交联形成聚集体,而聚集体大小、形态等因素最终影响功能特性。本研究综述了新型电物理加工技术对多尺度蛋白质结构变化的影响,以期为新一代电物理加工的战略构想和进一步产业化提供理论参考。

然而,电物理加工过程中,多尺度蛋白质结构的变化还受很多因素影响,如盐分、pH值、电极间隙、升温速率、温度和作用时间等,值得更深入研究,尤其是不同加工技术的具体作用机制。电物理加工技术也显现出一些不足,如适用性低、加热不均匀和设备费用高、无法大规模生产等,需要进一步优化电物理加工的设备和工艺参数等,以达到对蛋白质结构变化的适当控制,提高产品品质。此外,尽管最近的研究趋势偏向于各种电物理加工技术和各种非热加工技术,但是也不能忽略传统的加热、冷冻、解冻等方法的可能性和固有优势,同时在工业化应用过程中,也不能排除电物理加工技术产生有害副产物的可能性。

作者简介

第一作者:

丛海花,博士,副教授,硕士生导师,苏州农业职业技术学院,入选2022年上海市“揽蓄人才”B类,2018年大连市青年科技之星,2017年辽宁省第十二批“百千万人才工程”万人层次;中国食品工业协会营养师(2021,长期有效)、IFS国际注册营养师(2021,长期有效),教育部教师工作司及教育部高等教育司高等学校骨干教师(长期有效),辽宁省首批获得高等学校双语教师资格证书(长期有效),获教学成果奖8 项(其中排名第一共2 项,省级2 项);主持科研项目9 项(其中国家自然科学基金青年基金项目1 项、省级项目2 项),已结题7 项;参与国家级、省部级项目多项;主持教研项目7 项(其中教育部产学研项目1 项、省教育厅项目1 项),已结题6 项;发表科研/教研论文60余篇,其中第一作者和通讯作者论文20余篇;近五年来,指导本科生创新创业项目获得立项11 项(其中国家级2 项、省级2 项);指导本科生/研究生竞赛项目多项,获奖24项(其中国家级奖项6 项、省级奖项10 项);参编教材1 部,入选“十三五”规划教材;参与校正教材1 部,入选“十三五”规划教材;获得计算机软件著作权4 项(其中第1完成人1 项)。担任国家自然基金通讯评审,学术桥人才评审专家,全国本科毕业论文(设计)抽检信息平台评审专家,中国生物工学会生物基材料专业委员会终身会员、苏州食品安全与营养学会会员,担任《肉类研究》编委,《food Science and nutrition》、《食品科学》、《食品工业科技》、《食品质量安全检测学报》、《肉类研究》、《现代食品科技》、《实验科学与技术》等审稿人。主要科学研究方向:新型加热/冷冻/解冻技术,着重研究快速电物理加工对抑制蛋白质品质劣化及控制理论。

通信作者:

高岳,男,硕士研究生,教授;现任苏州农业职业技术学院食品科技学院副院长、党总支纪检委员,美国农业部农业研究院(USDA/ARS)访问学者,江苏省“青蓝工程”优秀教学团队带头人,江苏省“青蓝工程”中青年学术带头人;主要研究领域为农产品加工。近年来主持市厅级以上课题6 项,发表论文20余篇,授权专利16 项,其中发明专利3 项。作为主要成员立项建设江苏省高等职业教育高水平专业群、江苏省课程思政示范课程、苏州市高等职业教育创新团队;先后获江苏省职业教育类教学成果奖二等奖、全国职业院校技能大赛优秀指导教师、江苏省职业院校教学大赛二等奖、江苏省职业院校技能大赛优秀指导教师、苏州市自然科学优秀学术论文三等奖、全国职业技术院校在校生创意西点技术大赛优秀指导教师等。


本文《新型电物理加工对多尺度蛋白质结构的影响研究进展》来源于《食品科学》2023年44卷第13期261-271页,作者:丛海花,崔保威,张紫薇,周 倩,宋京城,高 岳,逯晓燕,黎茉可。DOI:10.7506/spkx1002-6630-20220616-175。