凝血法检测绿豆凝集素活性,并改进凝集活性检测兔血红细胞处理条件,在单因素试验的基础上设计响应面Box-Behnken试验,优化绿豆凝集素提取工艺条件。结果表明,凝集活性检测兔血红细胞的处理最佳条件为戊二醛体积分数0.15%、25 ℃处理血细胞20 min;胰蛋白酶添加量25 U/mL、25 ℃处理15 min,优化条件下提高了兔血红细胞凝集灵敏度且延长了兔血红细胞保存时间。磷酸盐缓冲溶液为绿豆凝集素最佳浸提溶液,绿豆凝集素优化工艺条件为料液比1∶9.09(g/mL)、NaCl浓度0.3 mol/L、浸提时间4.16 h,在此条件下最大绿豆凝集素比活力预测和验证值分别为134.91 U/mg和139.02 U/mg。
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