本研究从浓香大曲中筛选出1 株嗜热真菌HBFH10,经鉴定为小孢根霉(Rhizopus microsporus)。利用兼并引物,从菌株HBFH10中获得1 个新型甘露聚糖酶基因(RmMan134),该基因全长552 bp,无内含子,编码183 个氨基酸和1 个终止密码子。RmMan134酶蛋白分子由1 个信号肽序列(1~19 aa)和GH134家族的催化区组成。经异源表达后,重组RmMan134的最适反应温度为50 ℃,最适反应pH值为6.0,具有较强的热稳定性和pH值稳定性。RmMan134成熟蛋白分子质量约为18.5 kDa,存在糖基化修饰。经动力学性质测定,以魔芋胶为底物时,该酶的Vmax为57.1 μmol/(min·mg),Km为0.66 mg/mL。重组酶RmMan134对橙汁的澄清效果最为明显,澄清度提高了23.8%,其次苹果汁提高了11%,桃汁提高了7%左右。除此之外,添加重组酶使得葡萄汁的出汁率提高了7%左右。综上所述,甘露聚糖酶RmMan134在果汁加工中具有较好的应用前景。
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