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—— 中国食品杂志社
采用粟酒裂殖酵母诱导表达系统进行绿色木霉纤维二糖水解酶基因cbhⅡ的表达研究。通过PCR方法从绿色木霉基因组DNA中克隆到长度为1611bp并含有信号肽序列的cbhⅡ基因；将其插入到粟酒裂殖酵母诱导型表达载体pESP-2的Pnmt1启动子下游，得到重组质粒pESP-2-cbhⅡ；利用电转化方法将其转入粟酒裂殖酵母SP-Q01细胞中，通过对酵母转化子质粒DNA的PCR和双酶切鉴定，得到了含有cbhⅡ基因的酵母转化子，对转化子进行诱导培养后提取酵母总蛋白，进行SDS-PAGE电泳检测，得到一条约为81kD的目的蛋白条带；利用DNS法对酵母转化子上清液中的纤维二糖水解酶活性进行测定，结果表明，酶活力最大值为165U/mL。以上结果证明：cbhⅡ基因在Pnmt1启动子控制下在粟酒裂殖酵母中成功地获得表达，并且cbhⅡ自身的信号肽可以被粟酒裂殖酵母正确的识别，并将表达产物分泌至胞外。
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