采用木瓜蛋白酶和碱性蛋白酶双酶结合法对林蛙油进行酶解,利用凝胶层析法和HPLC法进行检测。结果表明:木瓜蛋白酶的最佳酶解条件为底物浓度1%、酶用量1200U/g、温度60℃、时间3.5h、pH6.0,碱性蛋白酶的最佳条件为加酶量500U/g、温度50℃、时间3.0h、pH8.0。酶解液利用SephadexG-15柱分离得到分子量小于1355D的肽段,经HPLC分析检测,色谱图上出现了三个高低不同的峰,其保留时间依次为21.837、23.300和24.499min。同时,木瓜蛋白酶和碱性蛋白酶结合可以有效地将林蛙油蛋白降解为肽,水解度达到17.8%,比单酶提高了5.6%;且产物具有较好的溶解性和流动性。
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