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水稻密码子优化的cry2A*基因在大肠杆菌中的表达及其表达产物的纯化
来源:食品科学网 阅读量: 89 发表时间: 2017-06-07
作者: 秦伟,黄昆仑,贺晓云,李欣,许文涛,林希瑾,罗云波
关键词: 抗虫基因; cry2A*; 转基因水稻; 表达; 纯化
摘要:

通过PCR从克隆载体pUC18-3Z/Cry2A*上扩增水稻偏爱型密码子优化的抗虫基因cry2A*,经限制性内切酶NdeI和BamHI双酶切定向插入到原核表达载体pET-28a(+),成功构建了在表达蛋白的N端只带有6个组氨酸标签的融合蛋白表达载体pET-28a(+)/Cry2A*,并转入大肠杆菌BL21(DE3)中。通过对其表达条件进行优化,发现在IPTG浓度为0.05mmol/L、诱导时间为3h、诱导温度为20℃的表达条件下目的蛋白大部分以可溶形式进行表达。采用Ni-NTA亲和柱纯化得到高纯度目的蛋白,薄层扫描分析蛋白纯度达到95%。

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