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—— 中国食品杂志社
目的：建立A群轮状病毒（rotavirus，RV）一步法反转录微滴式数字聚合酶链式反应（reverse transcriptase droplet digital polymerase chain reaction，RT-ddPCR）方法。方法：筛选特异性引物探针，建立并优化一步法RT-ddPCR方法，确定特异性；制备含A群RV目的片段的RNA标准物质，确定建立方法的检测限、准确度、重复性和复现性。A群RV阳性粪便样品梯度稀释后制作染毒液，制备人工染毒样品，分离病毒与食品基质，浓缩得到病毒悬液，提取RNA后，比较不同食品基质中一步法RT-ddPCR检测结果。结果：建立的一步法RT-ddPCR方法定量限为58 000.00～5.80 拷贝/μL，具有良好的特异性、准确性、灵敏度、重复性和复现性。各染毒水平下A群RV检出量和回收率在不同食品基质中存在显著性差异（P＜0.05）。结论：研究建立的一步法RT-ddPCR方法可准确定量A群RV RNA，食品基质可影响一步法RT-ddPCR检测结果，通过病毒回收率可计算食品中A群RV的实际载量。
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