为了探明绿豆肽级分与其免疫活性的关系,本实验采用葡聚糖凝胶G-15层析柱对绿豆肽进行分级,并将得到的3 个级分绿豆肽进行巨噬细胞增殖率、糖原含量、核酸含量以及细胞因子等免疫活性指标测定,以此优化出具有较高免疫活性的绿豆肽,并对其氨基酸序列进行鉴定。结果表明,不同级分绿豆肽可促进巨噬细胞增殖,其中MBPH-3级分绿豆肽促进效果最佳,相比空白组增殖率提高9.05%。同时发现不同级分绿豆肽可促进糖代谢以及核酸含量的升高,上调巨噬细胞细胞因子(白细胞介素-6、白细胞介素-1β、肿瘤坏死因子-α)表达量,其中MBPH-3级分绿豆肽的白细胞介素-6、白细胞介素-1β、肿瘤坏死因子-α表达水平分别为1 566.47、593.32、828.13 pg/mL,相比空白组(136.55、139.61、436.18 pg/mL)差异显著(P<0.05);同时不同级分绿豆肽又可抑制脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的巨噬细胞分泌细胞因子,肿瘤坏死因子-α、白细胞介素-1β、白细胞介素-6分泌量分别为2 152.94、1 058.81、859.96 pg/mL,相比LPS刺激组(2 923.19、3 707.09、2 880.74 pg/mL)具有明显的抑制效果。综上所述,MBPH-3绿豆肽免疫效果最佳,结构鉴定结果表明,MBPH-3的平均分子质量约903 Da,氨基酸序列为Asn-Asn-Tyr-Gly-Pro-Thr-Met。
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