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—— 中国食品杂志社
采用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳、双抗夹心酶联免疫吸附（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）等方法，以Jug r 1含量为指标，对云南7 个不同产地的泡核桃（Juglans sigillata）进行筛选，进一步利用硫酸铵分级沉淀、凝胶过滤层析、液相色谱-串联质谱等手段制备Jug r 1并进行优化和鉴定，通过圆二色谱对Jug r 1的结构进行表征，最后采用双抗夹心ELISA法测定其含量。结果表明：保山隆阳产地核桃的总蛋白含量和Jug r 1含量均最高，用于后续实验；经优化得到Jug r 1的最佳硫酸铵分级沉淀分离区间为40%～80%，进一步对其进行凝胶过滤层析的最佳条件为上样质量浓度30 mg/mL、上样体积4 mL、洗脱流速1 mL/min；在此条件下纯化得到Jug r 1含量达19.90 mg/120 mg上样量，蛋白得率为16.58%；质谱分析表明该蛋白符合Jug r 1的典型特征；圆二色谱显示Jug r 1的二级结构以α-螺旋为主，多种构象共存；经“两步法”分离纯化后可获得蛋白纯度占总蛋白96%以上的Jug r 1。本结果可为深入研究Jug r 1提供科学基础，并为其他坚果致敏蛋白的分离纯化提供参考。
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