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嗜酸乳杆菌ATCC4356分选酶A基因克隆、表达及功能分析
来源:食品科学网 阅读量: 114 发表时间: 2019-09-26
作者: 吴京,王文文,熊蓉露,吴振,潘道东,曾小群,郭宇星
关键词: 嗜酸乳杆菌|分选酶A|基因克隆|酶学特性|结构特性
摘要:

分选酶在细菌对宿主细胞的黏附过程中具有重要作用。为探究乳酸菌分选酶的特性及与其他致病菌分选酶的差异,以嗜酸乳杆菌ATCC4356为模板,构建分选酶A(sortase A,SrtA)重组表达载体pET28a-SrtAΔN48,转入大肠杆菌感受态细胞Transetta(DE3)内表达,使用Dabcyl-QALPTTGEE(Edans)探究其酶活特性。结果发现:嗜酸乳杆菌ATCC4356 SrtA(Lap-SrtAΔN48)分子质量为20kDa左右;Mg2+、Zn2+、Mn2+可提高Lap-SrtAΔN48的转肽能力;Ca2+不会影响SrtAΔN48的活性,明显区别于致病菌;且分选酶抑制剂查尔酮会抑制Lap-SrtAΔN48的活性。进一步通过蛋白质同源建模分析发现Lap-SrtA由8条中心β桶状结构互相折叠而成,属于经典的分选酶结构,Lap-SrtA的活性位点为His137、Cys198、Arg205。

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