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—— 中国食品杂志社
探讨双齿围沙蚕酶解多肽制备的关键技术及其对肺癌A549细胞的作用。以增殖抑制率为指标，确定最佳酶种并根据单因素试验和正交试验确定其最佳酶解工艺。经超滤获得1～3 ku的酶解液，通过阴离子色谱、凝胶过滤色谱和制备色谱对其进行进一步的分离纯化。采用四甲基偶氮唑蓝法测定沙蚕多肽PAP对肺癌A549细胞的增殖抑制率并通过倒置显微镜、吖啶橙/溴化乙锭荧光染色及Hoechst荧光染色观察其细胞形态的变化。实验结果表明最佳酶种是碱性蛋白酶，其最佳酶解条件为：酶解温度50 ℃、pH 11、料液比1∶1（g/mL）、酶解时间6 h、加酶量300 U/g。经纯化获得的多肽命名为PAP，其氨基酸序列为Ile-Glu-Pro-Gly-Thr-Val-Gly-Met-Met-Phe，且PAP对A549细胞的作用呈时间与剂量依赖关系，作用后细胞出现了凋亡的形态学特征。因此，PAP能明显抑制肺癌细胞A549增殖，可以诱导其发生凋亡而发挥抗肿瘤作用。
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