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—— 中国食品杂志社
通过比较鲢鱼卵半胱氨酸蛋白酶抑制因子（cysteine proteinase inhibitors，CPIs）粗提过程中的比活力（Azocasein法），确定其最佳粗提条件为：以含0.1 mmol/L苯甲基磺酰氟（phenylmethanesulfonyl fluoride，PMSF）的20 mmol/L磷酸盐缓冲液（pH 6.0）作为匀浆缓冲液，并于30 ℃对匀浆样进行pH 3.0酸处理10 min，然后碱回调至pH 8.0，CPIs纯度提高了15.54 倍。进一步经SP Sepharose Fast Flow阳离子层析验证表明，与pH 4.0相比，pH 3.0酸处理能高效除去活性峰Ⅱ中的酸碱及热不稳定杂蛋白，使CPIs比活力提高了48.22 倍。采用SephacrylS-200分子筛层析，获得部分纯化的低分子CPIs组分Ⅱ-b和Ⅱ-c，比活力和纯化倍数分别为1 098.59 U/mg、312.10 倍和1 769.23 U/mg、502.62 倍。电泳分析表明，明胶底物-SDS-反相酶谱法无法鉴定Ⅱ-b和Ⅱ-c的抑制活性；而与木瓜蛋白酶在适宜条件下反应后进行的十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（sodium dodecylsulfatepolyacrylamide gel electrophoresis，SDS-PAGE）则初步鉴定Ⅱ-b和Ⅱ-c中均含有至少7 kD和10 kD两种低分子CPIs。最后经质构分析表明，Ⅱ-b和Ⅱ-c以5 U/g添加入鲢鱼鱼糜时，均能够极显著提高鲢鱼鱼糜凝胶强度（48.77%和55.55%），抑制软化。
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