铅主要通过饮食进入人体并在体内积累,对人体免疫和代谢等系统造成损伤,补充硒可以显著改善铅暴露对机体的危害。本研究以杏鲍菇富硒蛋白(selenium-enriched protein from Pleurotus eryngii,SePEP)为原料,通过高效液相色谱-电感耦合等离子体质谱联用技术、傅里叶变换红外光谱等测定蛋白硒形态及结构。通过细胞实验探究蛋白体外模拟消化产物对Pb2+引起的RAW264.7细胞毒性的缓解作用。结果表明,SePEP硒含量为(360.64±3.11)mg/kg,硒形态主要包括硒代蛋氨酸(SeMet,(48.04±0.64)%(相对含量,下同))、硒代胱氨酸(SeCys2,(31.91±0.51)%)和甲基硒代半胱氨酸(MeSeCys,(14.65±0.36)%)。硒的添加显著促进了氨基酸的生成,改变了蛋白质的结构,α-螺旋结构相对含量由(20.30±0.87)%增加至(25.00±1.60)%,无规卷曲结构相对含量由(20.38±0.84)%减少至(13.85±1.66)%,总巯基与二硫键含量及表面疏水性均显著增加(P<0.05)。添加75 μg/mL SePEP消化产物后,Pb2+处理的RAW264.7细胞存活率由接近50%显著升高至(76.95±6.95)%,细胞培养液中乳酸脱氢酶释放量降低57.45%,并且3 种促炎细胞因子白细胞介素(interleukin,IL)-6、IL-8和肿瘤坏死因子α的释放受到显著抑制(P<0.05),说明SePEP消化产物对Pb2+暴露引起的RAW264.7细胞损伤有缓解作用。本实验研究成果可为研发安全、有效的改善铅毒性的功能富硒蛋白食品提供参考。
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