目的:探讨榆干离褶伞溶栓酶(Lyophyllum ulmarium fibrinolytic enzyme,LUFE)在大鼠动脉血栓形成过程中对血管内膜损伤的保护作用。方法:将50 只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、阿司匹林组和LUFE低、高剂量组。建立血栓模型前,阿司匹林组和LUFE低、高剂量组分别以10 mg/kg mb阿司匹林和100、400 mg/kg mb LUFE灌胃7 d。次日,除假手术组以外其余4 组以三氯化铁诱导建立大鼠颈动脉血栓模型。苏木精-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色观察颈动脉血管形态学变化;酶联免疫吸附法测定血清C反应蛋白(C-reactive protein,CRP)、白细胞介素(interleukin,IL)-6、IL-8、单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemoattractant protein-1,MCP-1)、细胞间黏附分子-1(intercellular cell adhesion molecule-1,ICAM-1)和血小板-内皮细胞黏附分子-1(platelet endothelial cell adhesion moleculer-1,PECAM-1)水平;采用流式细胞仪测定血小板-白细胞聚集体(platelet-leukocyte aggregates,PLA)水平。在体外,经LUFE干预后观察血小板在固化胶原上的黏附作用;采用流式细胞仪测定胶原刺激后血小板Ca2+水平;Western blot方法观察血小板T细胞跨膜连接蛋白(linker for activation of T cells,LAT)和磷脂酶Cγ(phospholipase Cγ,PLCγ)磷酸化水平。结果:LUFE干预后能明显减轻血管内膜的损伤,不同程度地降低血栓模型大鼠血清CPR、IL-6、IL-8、MCP-1、ICAM-1和PECAM-1水平,降低PLA水平。在体外,LUFE能降低血小板与胶原的黏附,并降低血小板Ca2+水平,下调血小板LAT和PLCγ蛋白的磷酸化水平。结论:LUFE抑制血栓形成过程中的血管炎症反应,这可能与其血管内皮细胞保护作用和抗血小板作用有关。
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