研究羟基红花黄色素A(HSYA)对过氧化氢(H2O2)所致L02人胎肝细胞内谷胱甘肽氧化的影响。采用5,5’-二硫代双硝基苯甲酸(DTNB)衍生化法,用高效液相色谱(HPLC)法测定L02细胞内还原型谷胱甘肽(GSH)浓度,二硫苏糖醇(DTT)还原细胞内氧化型谷胱甘肽(GSSG)后测定细胞内总GSH含量,以此计算出细胞内GSSG含量。HSYA预处理L02人胎肝细胞24h,再加入H2O2孵育1h后,利用HPLC测定细胞内GSH和GSSG水平及GSSG/GSH比值的变化。结果表明:GSH在0.1~2mmol/L范围内线性关系良好,最低定量限为0.1mmol/L,批内、批间精密度均小于10%,样品的回收率均在95%~105%之间。此测定GSH方法准确、精密、重复性好、稳定性高,可用于细胞中GSH和GSSG的测定。H2O2处理后L02细胞内GSSG/GSH比值明显升高,HSYA能够降低L02细胞中GSSG水平,使GSSG/GSH的比值下降,表明HSYA能够改善H2O2所致L02细胞的氧化胁迫状态,保护细胞免受氧化损伤。
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