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—— 中国食品杂志社
目的：结合多种酵母菌鉴定方法，分析腐败橙汁中酵母菌的种类，为快速检测和控制商品橙汁中酵母菌污染奠定基础，也为酵母菌种类的快速鉴定提供参考。方法：以分离自腐败橙汁的8株酵母菌株为材料，观察菌落和细胞形态。用引物ITS1/ITS4扩增菌株5.8S rDNA 及其ITS间隔区(5.8S-ITS)，对扩增产物用HhaⅠ、Hae Ⅲ 和 HinfⅠ进行限制性酶切片段多态性(RFLP)分析和测序；用引物NL1/NL4扩增26S rDNA D1/D2区并测序。结果：菌落特征观察将菌株初分为6组，细胞学观察粗分为3组，分子方法都分成4组。用限制性内切酶HhaⅠ、Hae Ⅲ和HinfⅠ对5.8S-ITS区产物进行 RFLP分析，观察到4种不同的图谱类型。5.8S-ITS 区和26S rDNA D1/D2区的序列分析结果相似，8株分离菌与GenBank中的4种酵母菌参考菌株序列一致性达99%以上。分离株与参考菌株以两区序列构建的NJ系统树都分成4枝：Y1与克鲁维毕赤酵母(Pichia kluyveri)，Y12-3、Y18-1与发酵毕赤酵母(Pichia fermentans)，Y22、Y23、Y26和Y56与Meyerozyma guilliermondii，Y47与Wickerhamomyces anomalus分别聚为一枝。结论：结合形态分析和核酸分析，将8株腐败橙汁分离菌鉴定为P. kluyveri var. kluyveri、P. fermentans、M. guilliermondii和W. anomalus 4个种，其中M. guilliermondii在腐败橙汁中首见报道；ITS- RFLP分析、26S rDNA D1/D2区测序与菌株形态特征结合能有效鉴定酵母菌，核糖体DNA分析可鉴定酵母到生物学种，菌落形态特征可反映种以下的遗传差异，因此，采用分子方法鉴定时不能忽视形态特征分析的重要性。
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