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新霉素的直接竞争酶联免疫分析法
来源:食品科学网 阅读量: 104 发表时间: 2017-06-07
作者: 徐乃丰,胥传来,匡 华,屈昌龙,许 阳,彭池方*
关键词: 新霉素|间接竞争酶联免疫吸附试验|直接竞争酶联免疫吸附试验
摘要:

首先用碳二亚胺(EDC)法将新霉素(NEO)偶联于载体蛋白-卵清白蛋白(ovalbumin,OVA),合成包被原OVA-NEO,SDS-PAGE 进行鉴定;用高碘酸钠法连接辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase,HRP),制备酶标抗原NEO-HRP并建立直接ELISA检测方法。通过一系列参数的优化,包括包被溶液、封闭溶液、竞争时间、抗体稀释液、pH值、反应温度、显色时间等,最终得到其IC20(抑制率为20%时的标准溶液质量浓度)<1ng/mL、半数抑制量(IC50)为7.6ng/mL,线性方程为y =-0.2798x+0.7456,R2=0.991。直接ELISA总耗时只需大约1h。

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