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二硫键稳定的抗氯霉素单链抗体的构建
来源:食品科学网 阅读量: 107 发表时间: 2017-06-07
作者: 李黄金,陈 伟,赵 林,柴伟佳,唐 伟
关键词: 氯霉素|二硫键稳定的单链抗体|高效表达|β- 环糊精分子伴侣|复性
摘要:

为构建一种食品残留检测用二硫键稳定的抗氯霉素单链抗体(sdsFvCAP)。以抗氯霉素抗体可变区基因为模板,通过引物突变PCR 在轻链和重链的可变区分别引入一个半胱氨酸定点突变,以重叠延伸PCR 组装成sdsFvCAP。在大肠杆菌系统强启动子T7 驱动下,sdsFvCAP 基因不能单独表达,而通过同义突变降低其5'端序列GC 含量则可实现高效表达。表达产物主要以包涵体形式存在,经β- 环糊精分子伴侣系统复性可获得亲和力与母本抗体相似的sdsFvCAP。所构建的sdsFvCAP 具有取代单克隆抗体用于氯霉素残留检测的潜力。

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