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裂殖壶菌鲨烯合酶基因的克隆及在大肠杆菌中的表达
来源：食品科学网 阅读量: 93 发表时间: 2017-06-07
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作者: 朱路英，朱清华，张学成
关键词: 原核表达|裂殖壶菌|鲨烯合酶|cDNA克隆
摘要:

为探讨裂殖壶菌烯合酶基因的克隆，以及在大肠杆菌中的表达。采用简并引物与RACE 相结合的方法从裂殖壶菌(Schizochytrium limacinum)中克隆出鲨烯合酶基因。分析表明该基因的cDNA 全长包括1672 个核苷酸，编码一个含446 个氨基酸的开放阅读框；在裂殖壶菌中以单拷贝的形式存在。同源分析显示裂殖壶菌鲨烯合酶的氨基酸序列中含有5 个保守基序。将裂殖壶菌鲨烯合酶的cDNA 序列连接到原核表达载体pGEX-4T-3 上构建融合表达载体，并在大肠杆菌BL21 中进行IPTG诱导表达，SDS-PAGE 及Western blotting 分析结果显示，诱导表达出的融合蛋白主要以包涵体的形式存在，其相对分子质量与预期相符；且融合蛋白具有一定的免疫原性。

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