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—— 中国食品杂志社
目的：建立一种精确可靠的鉴定常见的1 0 种动物( 猪、狗、牛、山羊、绵羊、马、鸡、鼠、三文鱼和鹿)的方法。方法：利用12S rRNA 基因的限制性酶切末端片段长度多态性(terminal restriction fragment lengthpolymorphism，T-RFLP)鉴别动物种类。将线粒体12S rRNA 基因通过引物的5＇端用FAM 荧光标记，从基因组DNA 中扩增450bp 的目的片段。引物对1(下游引物FAM标记，上游引物不标记)扩增的PCR 产物用限制性内切酶Alu Ⅰ酶切。引物对2(上游引物FAM标记，下游引物不标记)扩增的PCR 产物用限制性内切酶Tru9 Ⅰ酶切。得到的酶切产物分别在遗传分析仪ABI 3100 上进行毛细管电泳，片段大小用Peak Scanner 1.0 软件分析。结果：根据Alu Ⅰ酶切图谱能够区分鸡、马、猪和三文鱼，而鹿和牛、山羊和绵羊、鼠和狗因酶切图谱相同无法分开。根据Tru9 Ⅰ酶切图谱，能够进一步将鹿和牛、山羊和绵羊、鼠和狗分开。同一种动物不同个体的酶切图谱完全相同，结果具有可重复性。没有出现物种内多态的现象。大多数情况下，实际得到的末端片段长度与理论值非常接近，只存在2 ～5bp 的差异。结论：该方法操作简单、结果精确，适用于鉴定动物种类。
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