采用高效液相色谱(HPLC)法测定化橘红中的多种香豆素成分,并建立10 种香豆素混合标准品的分离方法。这10 种香豆素标准品是羟甲香豆素、香豆素、7- 甲氧基香豆素、呋喃香豆素、6- 甲基香豆素、5,7- 二甲氧基香豆素、佛手内酯、欧前胡素、异欧前胡素和香柠檬亭。10 种香豆素的分离条件:分离柱Nucleosil C18 反相柱(150mm ×4.6mm,3μm),流动相水- 甲醇- 乙腈,三元梯度洗脱,起始流速0.3ml/min,流速0.3~1ml/min,柱温35℃,分离波长315nm。标准品质量浓度范围为0.078~15.000μg/ml,回归方程的相关系数为0.999~1.000,线性关系极好。标准品连续5 次进样和在48h 内多次进样,保留时间和峰面积的相对标准偏差均不高于3.466%。对采自广东省茂名市化州市10 个不同栽培地点的化橘红样品分析,除6- 甲基香豆素和5,7- 二甲氧基香豆素未在样品分离中出现外,化橘红样品含有其余的香豆素成分。10 个样品间在香豆素含量上存在显著差异,其中7 号样品含量最高,香豆素达1380μg/g 干粉,异欧前胡素为1226μg/g 干粉,分别达0.138%和0.123%。各样品中基本以香豆素和异欧前胡素这两种香豆素含量为主。
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