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—— 中国食品杂志社
为准确快速地鉴定黄牛、水牛和牦牛的成分，研发具有这3 种牛特异性的引物和探针，并建立单重、双重和三重实时聚合酶链式反应（real-time polymerase chain reaction，real-time PCR）方法，同步检测上述3 种牛的成分。单重real-time PCR检测时，3 种牛的检测灵敏度均为0.025 ng/μL；双重real-time PCR检测时，两两组合的引物探针含量比例为1∶1时，黄牛的检测灵敏度降低至0.1 ng/μL，而水牛和牦牛仍为0.025 ng/μL；对三重real-time PCR检测体系进行优化，当黄牛、水牛和牦牛3 组引物探针的含量比例为3∶3∶2时，检测灵敏度最佳，黄牛和水牛的检测灵敏度可达到0.1 ng/μL，而牦牛的灵敏度仍可达到0.025 ng/μL。但上述双重和三重real-time PCR检测的灵敏度，是建立在3 种牛的含量比例为1∶1∶1的情况下，若3 种牛的比例差异较大，特别是黄牛和牦牛的含量比例差异较大时，如比例为9∶1时，含量低的成分会存在漏检。因此，在对整块肉的样品进行检测时，可采用三重real-time PCR的方法同步检测3 种牛的成分；若样品可能为上述3 种肉的为混合物，如肉糜、肉松等，则建议采用单重real-time PCR检测。
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