为克服酶联免疫吸附法无法检测羊乳中掺加的经过热处理的牛乳的局限,本研究首先通过气相色谱-质谱法发现牛乳区别于山羊乳的关键非蛋白生物标志物为N-乙酰氨基葡萄糖,然后基于该标志物开发基于高效液相色谱手段定量检测山羊乳中掺加的牛乳的方法。样品在70 ℃经1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮衍生60 min后,在高效液相色谱仪上使用反相C18色谱柱对目标物进行分离,在245 nm紫外波长下对其进行检测,根据N-乙酰氨基葡萄糖含量推算山羊乳中掺加的牛乳量。该方法的牛乳掺加量检出限和定量限分别为0.3%和1.0%,在1%~100%的牛乳掺加范围内线性良好,相关系数为0.999 4,该方法的加标回收率为100.4%~105.1%,在10、50 mg/L和100 mg/L加标质量浓度下,日内和日间精密度分别为1.8%和2.0%、1.7%和3.7%、2.6%和2.7%。该方法具有较高的灵敏度、准确度和精密度,可用于山羊乳中掺加牛乳的定量分析。
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