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—— 中国食品杂志社
选取阪崎克罗诺杆菌中atpD、gyrB、infB、fusA和glnS管家基因作为靶序列，构建质粒标准样品快速检测克罗诺杆菌。通过测序和菌落聚合酶链式反应（polymerase chain reaction，PCR）对构建的重组质粒进行验证，传15 代后对重组质粒进行测序验证质粒稳定性。制备的atpD、gyrB、infB、fusA和glnS质粒标准样品，对其进行定性实验，并检测其检出限和稳定性，然后使用atpD、gyrB、infB、fusA和glnS质粒标准样品对婴幼儿奶粉中克罗诺杆菌进行检测。通过菌落PCR和测序结果显示atpD、gyrB、infB、fusA和glnS质粒标准样品制备成功。PCR体系对质粒标准样品检测具有特异性，atpD、gyrB、infB、fusA和glnS检出限分别为1.14×106、1.07×107、1.09×107、1.73×105、7.54×105 拷贝/μL。质粒冻干粉可以在－20、4、25 ℃稳定保存90 d。将质粒标准样品用于23 份婴幼儿奶粉样品检测，检测出1 份具有gyrB管家基因。参考GB 4789.40—2016《食品微生物学检验 克罗诺杆菌属（阪崎肠杆菌）检验》的方法进行传统微生物分离检测，未检测出克罗诺杆菌。相较于传统方法质粒标准样品的应用极大提高了样品的检测效率。
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