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—— 中国食品杂志社
将不同长度类弹性蛋白多肽（elastin-like polypeptide，ELP）与纳米抗体融合表达，获得具有温度响应能力的抗黄曲霉毒素B1（aflatoxin B1，AFB1）纳米抗体。采用递归定向连接克隆得到重组表达载体pET30a-G8-ELP20、pET30a-G8-ELP40、pET30a-G8-ELP60、pET30a-G8-ELP80，分别转化大肠杆菌BL21（DE3）菌株，表达后经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis，SDS-PAGE）分析显示4 种融合蛋白均以不溶性包涵体形式存在于菌体沉淀中，对其进行变性处理后，分别采用稀释复性、可逆相变循环（inverse transition cycling，ITC）纯化、透析复性、柱上复性4 种方式对包涵体蛋白进行复性。SDS-PAGE分析4 种复性方式分别获得的4 种融合蛋白，结果显示其纯度差异不显著，但ITC纯化蛋白得率最高，分别为83%、90.7%、89.5%、88.3%；间接竞争酶联免疫吸附实验测定复性后融合蛋白活性，结果表明由稀释复性法获得的G8-ELP80重组蛋白IC50最低（4.35 ng/mL）；浊度分析法测得融合不同长度ELP标签纳米抗体的相变温度分别为45、38、32、28 ℃；圆二色谱分析显示4 种融合蛋白二级结构均以β-折叠、β-转角为主，与预估结果相符。本研究将ELP标签与抗AFB1纳米抗体融合表达，实现了纳米抗体的温度刺激响应性，系统比较了不同复性方式对蛋白特性的影响，为后续AFB1检测分析提供了基础。
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