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—— 中国食品杂志社
目的：采用逆转录微滴数字聚合酶链式反应（reverse transcription droplet digital polymerase chain reaction，RT-ddPCR）技术和QX200 Droplet Digital PCR System，建立一步法RT-ddPCR高灵敏快速检测生菜中GII型诺如病毒（norovirus genegroup II，NoV GII）的方法。方法：优化RT-ddPCR检测NoV GII的反应体系；通过10?倍梯度稀释的NoV GII线性阳性质粒确定RT-ddPCR的检测范围；利用其他常见的肠道病毒核酸（非GII型诺如病毒）作为反应模板，与NoV GII核酸同时进行RT-ddPCR，判定反应体系的特异性，并通过不同时间多次检测样品的方式判断该检测方法的稳定性。采用ISO/TS 15216-1:2013食品中诺如病毒RNA提取方法，对人工染毒不同水平（高、中、低）的NoV GII生菜样品进行检测，同时研究去除抑制物前后对RT-ddPCR检测的影响，并与逆转录定量聚合酶链式反应（reverse transcription quantitative polymerase chain reaction，RT-qPCR）进行检测回收率的对比，探究RT-ddPCR在食品中NoV?GII快速与定量检测上的发展潜力与应用前景。结果：RT-ddPCR的最高检测限为8.47×104?copies/μL，最低检测限为2.12?copies/μL，RT-ddPCR扩增效率为95.44%，标准曲线相关系数为0.997?3。在不同浓度人工染毒生菜样品中，抑制物的存在对ddPCR回收率检测结果没有显著性差异。在高、中染毒浓度下，抑制物对RT-qPCR与RT-ddPCR回收率检测结果影响不显著。低浓度下，未去除抑制物的RT-qPCR法平均回收率仅1.43%，与去除抑制物后的RT-qPCR检测结果（平均回收率为9.71%）有显著差异，且与RT-ddPCR的检测结果（未去除抑制物的RT-ddPCR平均回收率为11.80%，去除抑制物后平均回收率为12.53%）存在显著性差异。结论：生菜抑制物对RT-ddPCR的检测影响不显著，利用RT-ddPCR可有效测出低浓度的受污染样品，避免用现有的RT-qPCR方法因抑制物带来的“假阴性”检测结果。本实验建立的RT-ddPCR方法能高效、灵敏地检测出受污染食品中NoV?GII的低病毒含量，在食源性病毒检测中具有可观的发展潜力和应用前景。
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