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—— 中国食品杂志社
利用拟南芥（Arabidopsis thaliana）蔗糖合酶AtSUS3构建活化糖配体尿苷二磷酸葡萄糖（uridine diphosphate glucose，UDPG）再生体系，与高效催化莱鲍迪苷D（rebaudioside D，RD）合成的糖基转移酶协同偶联完成RD的高效生物催化。从拟南芥cDNA克隆获得AtSUS3基因，将其装配至pET28a获得表达质粒pLW105，随后pLW105与携带糖基转移酶EUGT11基因的质粒共转化大肠杆菌BL21（DE3）构建双酶共表达工程菌。在不添加UDPG或者尿核苷二磷酸（uridine diphosphate，UDP）的条件下，以上述双酶共表达工程菌全细胞催化莱鲍迪苷A（RA）获得的底物摩尔转化率大于80%，RD产量达到930?mg/L。随后构建双酶基因串连质粒pLW108及双酶共表达大肠杆菌BL21（DE3）工程菌。用串连质粒构建的工程菌催化效果与双质粒共转化相同。采用共表达双酶工程菌的发酵破碎粗酶进行催化，结果显示以粗酶催化可简化催化体系，并可将细胞催化体系所需高质量浓度蔗糖用量降至质量浓度5 g/100 mL，同时在不添加外源UDPG的条件下实现RD的高效生物催化，RA底物摩尔转化率达到93%，RD产量约为1?051?mg/L。
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