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—— 中国食品杂志社
烟酰胺磷酸核糖转移酶（NAMPT）是烟酰胺单核苷酸（NMN）生物合成途径中的关键限速酶,该研究选取隐球菌科（Comamonadaceae）细菌来源的NAMPT基因在大肠杆菌（Escherichia coli）BL21（DE3）中进行异源表达。以其为出发菌株,通过分子对接技术分析确定突变位点,并采用同源重组技术构建突变菌株。通过测定NMN产量及NAMPT活力筛选得到高产NMN突变菌株,并通过单因素试验对其诱导条件进行优化。结果表明,出发菌株的NMN产量为6.53 mg/L。分别将出发菌株第257位和259位的氨基酸残基定点突变为色氨酸、缬氨酸后获得单突变体N1、N2及双突变体N3,其NMN产量分别为6.88 mg/L、9.38 mg/L、10.05 mg/L,较出发菌株分别提高了5.36%、43.64%、53.91%;NAMPT活力分别为42.08 U/mL、46.23 U/ mL、50.30 U/mL,较出发菌株分别提高5.73%、14.19%、21.13%。突变体N3产NMN的最佳诱导条件为诱导时机（OD600 nm值）1.2、诱导剂浓度0.5 mmol/L、诱导时间12 h、培养温度30 ℃、投料比（葡萄糖∶烟酰胺）2∶1。在此优化条件下,NMN产量达到13.20 mg/L,较优化前提高31.34%。该研究结果为后续发酵生产NMN提供了优质底盘菌株。
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