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—— 中国食品杂志社
乳酸脱氢酶(LDH)是干酪乳酸菌(L.casei)合成L-乳酸途径中的关键酶，通过构建过量表达乳酸脱氢酶的重组干酪乳杆菌，提高干酪乳杆菌发酵产乳酸的能力。根据干酪乳杆菌乳酸脱氢酶的基因序列设计引物，PCR扩增获得乳酸脱氢酶基因(ldh)，将其连接到乳酸杆菌穿梭质粒pMG36e，构建重组质粒pMG-ldh，电转入L.casei，利用红霉素MRS平板筛选阳性克隆，获得表达乳酸脱氢酶的重组菌L.casei pMG-ldh，SDS-PAGE和酶活分析结果表明成功表达了一个约37kD的乳酸脱氢酶蛋白，重组酶活力最高达95U/mL，较原始菌23U/mL提高了近3.1倍。为进一步提高其产乳酸能力，添加4mmol/L激活剂FBP和8mg/L烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)前体物烟酸，结果表明：重组菌L.caseipMG-ldh乳酸积累128.2g/L，生产强度达到3.04g/(L.h)，较原始菌株L.casei分别提高了35%和53%，发酵周期缩短6h。
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