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—— 中国食品杂志社
目的：研究丝状噬菌体基因V蛋白(gene V protein，GVP)基因的合成、重组表达及其功能。方法：根据GVP的基因序列，选择大肠杆菌偏爱的密码子，设计合成了8个寡核苷酸片段，利用重叠延伸PCR合成GVP基因序列，将其与原核表达载体pET-28a-c(＋)质粒重组，转化大肠杆菌，获得GVP蛋白阳性表达菌株，异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导表达，产物经Ni+-NTA琼脂糖凝胶层析纯化，获得目的蛋白GVP，DNA结合实验检测其功能。结果：成功合成出GVP基因，重组体在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导获得高效表达，DNA结合实验表明GVP与单链DNA间解离平衡常数Kd=7.27×10-5mol/L。结论：重组构建并高效表达的GVP蛋白具有较高单链DNA结合能力，可用于食品病原微生物特定单链DNA分子的浓缩和分离。
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