为建立一条制备酪蛋白磷酸肽(CPPs)的新工艺路线。采用酶解与超滤耦联技术初步分离制备酪蛋白生物活性肽,然后通过树脂层析将酪蛋白生物活性肽中的酪蛋白磷酸肽和非磷酸肽分离。选用碱性蛋白酶Alcalase在切向流酶膜反应器中(膜截留分子质量10kD)连续酶解3h、酶解温度50℃、pH8.5。重点研究大孔弱碱性阴离子交换树脂D303对酪蛋白生物活性肽的分离纯化工艺,并采用单因素试验优化CPPs的分离纯化工艺参数,确定D303树脂的较佳动态吸附解吸条件:上样流速1BV/h、上样量100mL、洗脱温度45℃、洗脱酸浓度0.15mol/L HCl,获得磷酸肽N/P比为7.21,P洗脱得率为93.11%。
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