选用常规发酵乳菌种,探讨不同溶剂、不同浓度的羧基荧光素二醋酸酯(5-(6)-Carboxyfluorescein diacetate,5(6)-cFDA)标记乳酸菌细胞的影响因素。结果显示:水、PBS 和二甲基亚砜(DMSO)配制的5(6)-cFDA 标记初期,细胞标记率分别为94.8%、95.2% 和99.77%,放置30d 后细胞标记效果分别下降到51.53%、55.6% 和96.7%;每毫升菌悬液加60μL 的5mg/mL 5(6)-cFDA(相当于终浓度为6.52 × 10-7mol/L),其荧光强度与5(6)-cFDA 浓度成正比,且标记效果最理想。实验还证实了1 × 106~1 × 107cells/mL 是流式细胞仪检测细胞活性较适合的浓度,且标记率较高;在pH7.0 的条件下对细胞活性和发光强度影响最小,其标记率达到98.3%。
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