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—— 中国食品杂志社
根据Genbank 公布的河豚鱼细胞色素b 基因序列，应用软件Primer Premier 5.00 版设计了7 对引物，经过PCR 筛选，确定可以在所有8 个供试河豚鱼样品中检出目的DNA 片段的引物HT-1，用于建立河豚鱼的PCR 检测方法。对该PCR 方法中6 个因素包括退火温度、Mg2+ 终浓度、Taq DNA 聚合酶用量、dNTPs 终浓度、引物终浓度和模板DNA 用量进行优化，确定优化的PCR 扩增体系：10 × PCR 缓冲液2μL，MgCl2 终浓度1.5mmol/L，Taq DNA 聚合酶1.0U，dNTPs 终浓度300μmol/L，引物终浓度0.2μmol/L，DNA 模板400ng，加纯水至总体积20μL。扩增程序定为94℃预变性5min，94℃变性30s，62℃退火30s，72℃延伸30s，40 个循环，72℃延伸5min。据此建立河豚鱼成分PCR 检测方法，并通过河豚鱼与非河豚鱼的PCR 检测结果比较，验证了该方法的河豚鱼特异性。研究结果还表明，该方法的检出限为0.1%，含量为0.1% 的河豚鱼样品PCR 检出率至少在97.5% 以上。
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