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重组弹性蛋白酶诱导表达、纯化及酶学特性研究
来源:食品科学网 阅读量: 132 发表时间: 2017-06-07
作者: 谷新晰,许文涛,黄昆仑,罗云波,林希谨,陈卓君,田洪涛 , ,*
关键词: 弹性蛋白酶|诱导表达|纯化| 酶学特性
摘要:

将已构建好的表达载体pPIC3.5K/PAE转化毕赤酵母KM71, 经甲醇诱导表达弹性蛋白酶, 通过对发酵条件的初步优化, 确定毕赤酵母重组菌株表达的最佳条件为:装填量10%, 培养基为BMMY, 甲醇浓度为1%。通过DEAE-Sepharose FF弱阴离子交换柱一步纯化, 获得良好的纯化效果。该重组蛋白酶最适pH范围为6.0~8.5, 最适温度范围为25℃~40℃, 催化反应条件温和。Ca2+和Mg2+对重组弹性蛋白酶活性有不同程度的促进作用,Zn2+,Cd2+,Mn2+, Fe2+, Co2+, Cu2+和EDTA对该酶有不同程度的抑制作用。

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