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—— 中国食品杂志社
为在泡盛曲霉中表达外源基因、克服泡盛曲霉常规转化法效率低下的瓶颈，本研究拟构建采用农杆菌介导转化法的泡盛曲霉表达载体。通过PCR，从糖化酶基因(glaA)高效表达的泡盛曲霉菌株SG1 基因组DNA 扩增获得glaA 2.1 kb 启动子片段(包含信号肽编码序列)及1.1kb 终止子片段，构建了外源基因表达盒。以根瘤农杆菌双元载体pCAMBIA1302 为基础，删除非必需区段及多余限制酶位点，插入上述外源基因表达盒及来自丝状真菌标记载体pAN7-1 的潮霉素抗性标记，构建采用农杆菌介导转化法的泡盛曲霉分泌整合型表达载体pSUAA52am。转化结果表明：采用原生质体法的转化效率为21 个转化子/106 分生孢子，而农杆菌介导法可达1106 个转化子/106 分生孢子，是原生质体法的53 倍。构建载体成功利用glaA 表达盒与农杆菌介导转化法的高效特性，可为利用泡盛曲霉高效表达外源基因奠定基础。
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