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—— 中国食品杂志社
采用重组酶聚合酶扩增技术（recombinase polymerase amplification，RPA），开发产志贺毒素大肠埃希菌（Shiga toxin-producing Escherichia coli，STEC）的等温检测方法，结合圆盘式微流控芯片快速检测目标微生物。以stx1和stx2基因为靶点，设计和筛选适宜的RPA检测引物和探针序列，验证了19 株STEC菌株（含9 种stx基因亚型）和21 株非STEC菌株，并采用人工污染的牛肉样品对集成化的微流控芯片进行评价。筛选出检测stx1和stx2基因的高特异性引物、探针组合，与美国农业部微生物实验室技术指南中STEC定量聚合酶链式反应（real-time polymerase chain reaction，real-time PCR）方法相比，目标基因检测的包容性和排他性均为100%。荧光RPA微流控芯片法在20 min内可同时进行32 个反应，可检测STEC菌体灵敏度为9.5×103 CFU/mL。根据GB 4789.6—2016《食品微生物学检验 致泻大肠埃希氏菌检验》的规定经增菌培养后在人工污染牛肉样品中可检测1 CFU/25 g的STEC污染，方法的相对正确度和相对检出水平均为100%。本研究开发了一种荧光RPA微流控芯片检测方法，可检测常见stx基因亚型STEC菌株，操作简单、反应速度快，适用于STEC的高通量快速检测。
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