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—— 中国食品杂志社
为实现酶法合成高附加值的β-苯丙氨酸，首先化学合成来源于紫衫（Taxus chinensis）的苯丙氨酸变位酶（phenylalanine aminomutase，PAM）基因（Tcpam），构建大肠杆菌重组质粒Pet-sumo-Tcpam，转入大肠杆菌中进行异源诱导表达，采用镍柱亲和层析制备电泳纯的重组酶TcPAM，用于催化合成R-β-苯丙氨酸。结果表明：重组质粒Pet-sumo-Tcpam成功在大肠杆菌中实现高效表达，获得可溶性的重组TcPAM，经过亲和层析制备出电泳纯的重组TcPAM。质谱和圆二色谱检测分析结果表明，TcPAM能够催化α-苯丙氨酸异构化为R构型的β-苯丙氨酸。TcPAM在最适温度30 ℃、pH 9的条件下，酶活力达到4.11 U/mg，金属离子K＋、Fe2＋和Ca2＋对TcPAM的活性影响较小，而Cu2＋和Zn2＋有强烈抑制性，表面活性剂十六烷基三甲基溴化铵、十二烷基硫酸钠、Triton X-100和Tween 80对重组酶活力影响较小，相对酶活力保持在90%以上。进一步利用TcPAM催化α-芳香丙氨酸异构合成β-芳香丙氨酸，结果表明：苯环上携带不同基团的α-芳香丙氨酸为底物时，苯环上携带供电子基团比吸电子基团的底物转化率更高，底物的α-氨基容易转移至β位，其中4-MeO-β-苯丙氨酸的产率最高，达到45%，为建立酶法合成R-β-芳香丙氨酸提供了参考。
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