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—— 中国食品杂志社
为探究不同共价修饰位点对β-乳球蛋白（β-lactoglobulin，β-LG）抗原性影响，采用聚乙二醇（polyethylene glycol，PEG）定点修饰技术对β-LG第121位半胱氨酸（Cys121）游离巯基进行修饰。通过单因素试验优化，得到最佳修饰条件：β-LG与mPEG-MAL物质的量比1∶30，在0.1 mol/L，pH 7.0的磷酸钠缓冲液（含3 倍物质的量的TCEP，25%乙醇及2 mmol/L EDTA）中4 ℃反应24 h。使用优化条件制备产物修饰率达64.1%，分离纯化后产物纯度达94%。游离巯基含量测定结果显示修饰后β-LG游离巯基含量由52.3 μmol/g降为0.3 μmol/g。经验证mPEG-MAL与β-LG Cys121游离巯基发生特异性结合。经巯基定点修饰后，β-LG-MAL较天然β-LG抗原性显著提升25.9%，巯基修饰与前期不同位点修饰抗原性结果相反，定点修饰能有效探究不同位点共价修饰对蛋白抗原性的影响。
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