
本研究通过中性蛋白酶、木瓜蛋白酶、碱性蛋白酶、胰蛋白酶及胃蛋白酶的单酶/复酶组合策略酶解牦牛乳酪蛋白,获得15 种酶解多肽溶液。以1,1-二苯基-2-三硝基苯肼自由基清除率、2,2’-联氮双(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)阳离子自由基清除率及H2O2诱导的AML12肝细胞氧化应激损伤模型存活率为初筛指标,发现中性蛋白酶解、胰蛋白酶-木瓜蛋白酶双酶解及胰蛋白酶-中性蛋白酶-胃蛋白酶三酶解产物(20 倍稀释)具有显著抗氧化活性,不仅能够高效清除自由基,还能够将损伤细胞存活率分别提升至69.38%、65.95%、63.32%(P<0.01)。进一步利用DEAE-52纤维素柱层析与Sephadex G-50凝胶层析进行分级纯化,筛选出5 种抗氧化多肽组分(Z1-C、Z3-B、YM3-B、YZW1-B、YZW3-B),其能使细胞存活率进一步显著提升至72.20%~82.19%(P<0.000 1)。通过荧光显微成像及酶联免疫吸附测定证实,上述多肽组分可显著降低细胞内氧化损伤标志物(活性氧、丙二醛、一氧化氮)及炎症因子(肿瘤坏死因子α、白细胞介素-1β)水平。结果表明,牦牛乳酪蛋白酶解多肽通过协同抗氧化与抗炎作用,能够有效抵御肝细胞氧化应激损伤。本研究可为开发靶向肝病干预的功能性食品提供理论依据。
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