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—— 中国食品杂志社
为解决发酵乳中霉菌检测周期长、定量难的问题，以发酵乳中常见霉菌为对象，通过微滴式数字聚合酶链式反应（droplet digital polymerase chain reaction，ddPCR）对样品中的目标序列进行绝对定量的基因拷贝数检测，建立市售发酵乳中霉菌的系统检测方法。确定了适用于发酵乳霉菌检测的最优ddPCR反应体系及扩增程序，所建立的方法在特异性、灵敏度及定量准确性方面均呈现良好性能。特异性检验显示，仅目标霉菌（黑曲霉、橘青霉、产黄青霉）出现阳性扩增，对酵母菌、乳酸菌及致病菌无交叉反应；灵敏度检测表明，最低检测质量浓度（0.625 ng/μL）时，阳性基因拷贝数为9 copies/μL。此外，本方法还确定了菌悬液浓度与DNA质量浓度、DNA质量浓度与基因拷贝数的线性关系式，且相关系数均大于0.99，在此基础上得到菌悬液浓度与基因拷贝数的线性关系式。在人工污染样品检测中，ddPCR方法结果与GB 4789.15—2016《食品安全国家标准 食品微生物学检验 霉菌和酵母计数》方法具有一致性，且无需标准曲线即可实现绝对定量，有效缩短检测周期。
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